片仔癀减轻5-氟尿嘧啶引起肠道损伤的作用研究

摘要

目的:通过体内实验研究片仔癀(Pien Tze Huang，PZH)对5-氟尿嘧啶(5-fluoro-uracil，5-FU)所致肠道损伤的减轻作用，并探讨其机制，为其进入临床应用奠定理论基础。
　　方法:将对数生长期的鼠源性结肠癌CT26细胞制备成单细胞悬液，以2×106/ml与基质胶1∶1混合后，于BABL/c鼠右前肢腋窝处皮下接种建立皮下移植瘤动物模型。待瘤体长约至300-350mm3时按照瘤体大小将小鼠随机分为4组，包括对照组、片仔癀组、5-FU组、5-FU+片仔癀组，每组8只。并分别用5-FU(150mg/kg)和片仔癀(250mg/kg)进行干预。其中，5-FU只于分组当天腹腔注射1次;片仔癀于分组当天开始灌服，每天1次，连续给药4天。对照组给予腹腔注射和灌服等容体积的生理盐水。每天称量各组小鼠的体重，并做好记录。每天观察各组小鼠的腹泻情况，并进行评分。于第5天采用颈椎脱臼法处死小鼠，分离空肠组织，用4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，切4μm厚度制作石蜡切片。随后，采用苏木素-伊红染色观察片仔癀对空肠组织病理形态学改变的影响，并根据Macpherson and Pfeiffer肠组织病理学评分标准对小鼠空肠组织病理形态学的改变进行分级;采用TUNEL法检测片仔癀对5-FU引起的肠道细胞凋亡的影响;采用免疫组织化学染色法检测片仔癀对空肠组织中Bcl-2及Bax在蛋白水平表达的影响。
　　结果:(1)与对照组和片仔癀组相比，5-FU组小鼠体重明显下降，且均出现腹泻症状;病理切片观察到肠道黏膜出现不同程度的损伤，如肠黏膜绒毛变短，肠上皮细胞水肿，炎性细胞浸润，固有层水肿等;TUNEL实验结果显示肠道组织内肠腺窝细胞发生大量凋亡(P＜0.05);免疫组织化学染色结果显示空肠组织中Bcl-2的表达明显下降(P＜0.05)，Bax的表达显著升高(P＜0.05)。(2)与5-FU组相比，联合组小鼠的体重无明显改善(P＞0.05)，但腹泻发生率显著降低（P＜0.05）;肠道黏膜损伤明显减轻;肠道组织内肠细胞凋亡明显减少(P＜0.05)，Bcl-2的表达明显升高(P＜0.05)，Bax的表达显著下降(P＜0.05)。(3)对照组和片仔癀组之间的小鼠体重、腹泻症状、空肠组织损伤程度、肠道细胞凋亡情况均无明显差异(P＞0.05)。
　　结论:(1)片仔癀对5-FU所致的肠道损伤具有减轻作用，能明显改善小鼠的腹泻症状及减轻肠道黏膜损伤程度。(2)片仔癀通过减少肠道细胞的凋亡及调节与凋亡相关的Bcl-2及Bax的表达减轻5-FU引起的肠道损伤，这可能是片仔癀减轻5-FU所致肠道损伤的作用机制之一。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

前言

材料与方法

1 细胞株及动物

1．1 细胞株

1．2 动物

2 药物、试剂、耗材、仪器

2．1 药物

2．2 主要试剂及耗材

2．3 主要仪器

3 实验方法

3．1 常用试剂的配制

3．3 建立模型

3．4 动物分组

3．6 标本采集

3．7 观察指标及检测方法

3．8 统计学分析

结果

1．片仔癀对5-FU引起的小鼠体重减轻及腹泻症状的影响

2．片仔癀对5-FU引起的小鼠空肠组织损伤的影响

3．片仔癀对小鼠肠道细胞凋亡的影响

4．片仔癀对小鼠空肠组织中Bcl-2和Bax表达的影响

讨论

结论

问题与展望

参考文献

致谢

综述

作者简历