从TLR4/NF-κB通路探讨芪药鸡金粥对化疗后大鼠胃肠道紧密连接蛋白的影响

摘要

目的：
　　从TLR4/NF-κB信号通路角度进一步研究芪药鸡金粥在化疗大鼠模型的消化道紧密连接蛋白中的调控作用;观察该药膳对化疗大鼠胃肠道损伤、脾气虚症状和体重状况的影响;初步明确芪药鸡金粥的剂量差异与相关实验结果间变化的关系。
　　方法：
　　将40只SPF级Wistar大鼠随机分为模型组、高剂量药膳组、常规剂量药膳组、低剂量药膳组和空白组，每组各8只。实验共16天。实验第1天对模型组及各剂量药膳组大鼠行5-FU150mg/kg一次性腹腔注射，复制化疗所致胃肠黏膜损伤大鼠模型及脾气虚证候大鼠模型，空白组给予等量生理盐水腹腔注射。实验2-15天，模型组及空白组给予10ml/kg白粥灌胃;高剂量药膳组、常规剂量药膳组、低剂量药膳组分别给予20ml/kg、10 ml/kg、5ml/kg芪药鸡金粥灌胃。实验期间观察每组大鼠体重及脾气虚症状并记录;实验结束后采用酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA)检测各组大鼠肠道TLR4/NF-κB信号通路蛋白(TLR4、NF-κBp50、NF-κ Bp65和IκBα)表达水平，以及大鼠肠道紧密连接蛋白（Claudin-1、Occludin、JAM-1和Z0-1）的表达水平。采用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining，HE)制作大鼠胃肠黏膜病理切片，观察大鼠胃肠黏膜状况。使用XFuor4系统对ELISA实验结果进行处理，并用SPSS20.0软件进行实验数据的统计分析。
　　结果：
　　1、大鼠肠道紧密连接蛋白的变化
　　各组大鼠Claudin-1蛋白表达情况的差异有统计学意义(P＜0.05);组间两两比较结果显示，各剂量药膳组和空白组Claudin-1蛋白的表达水平均高于模型组，其中以空白组蛋白表达水平最高;各剂量药膳组间Claudin-1蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)。各组大鼠Occludin蛋白表达情况差异无统计学意义（P＞0.05）。各组大鼠JAM-1蛋白表达水平的差异有统计学意义(P＜0.05);组间两两比较结果显示，高剂量药膳组、低剂量药膳组及空白组JAM-1蛋白表达水平高于模型组，其中以空白组蛋白表达水平最高;但各剂量药膳组间JAM-1蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)。各组大鼠ZO-1蛋白表达水平的差异有统计学意义(P＜0.05);组间两两比较结果显示，各剂量药膳组与模型组、空白组的比较差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　2、大鼠TLR4/NF-κB通路蛋白的变化
　　各组大鼠IκBα蛋白变化水平的差异有统计学意义(P＜0.05);组间两两比较结果显示，模型组IκBα蛋白的表达水平高于常规剂量药膳组和低剂量药膳组，其中以常规剂量药膳组蛋白表达水平最低;各剂量药膳组间IκBα蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P＞0.05)。各组大鼠NF-κBp50及NF-κBp65蛋白表达情况变化差异无统计学意义（P＞0.05）。各组大鼠TLR4蛋白变化表达情况的差异有统计学意义（P＜0.05）;组间两两比较结果显示，空白组TLR4蛋白表达水平低于模型组及各剂量药膳组，以模型组的表达最高，但各剂量药膳组之间结果比较差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　3、大鼠胃肠黏膜病理损伤的变化
　　各组大鼠胃黏膜绒毛结构均较完整、边缘整齐;但充血程度存在差别，以模型组最为严重，表现在胃绒毛间红细胞分布较密集，固有层毛细血管充血现象较为明显;各剂量药膳组间充血状况未见明显差异。
　　各组大鼠回肠黏膜病理损伤评分差异无统计学意义(P＞0.05);但仍可以看出各组之间回肠黏膜结构的形态差异，以模型组肠黏膜损伤最为严重，可见绒毛变性、萎缩，部分绒毛脱落，完整性破坏;低剂量药膳组次之;常规剂量药膳组绒毛形态不规则，低矮、稀疏、肿胀;高剂量药膳组肠黏膜绒毛结构较完整，绒毛整齐密集，在形态上与空白组差别较小。
　　4、大鼠脾虚症状评分的变化
　　造模后除空白组外，各组大鼠均出现了肢体倦怠、皮毛脱失、萎黄及腹泻等脾气虚症状，说明脾气虚大鼠造模成功。实验期间，各组大鼠评分于第二天明显升高，整个实验期间模型组及各剂量药膳组评分高于空白组水平，纵观，以模型组的评分最高，空白组脾气虚症状评分变化幅度较平稳。
　　5、大鼠体重的变化
　　实验2-7天，除空白组外，其余各组大鼠体重显著下降，并于实验5-6天降至最低，之后各组大鼠体重呈波动上升趋势;与模型组相比，高剂量药膳组大鼠体重水平高于模型组;空白组大鼠体重呈进行性增长趋势，且高于同期各个药膳组及模型组水平。
　　结论：
　　1、芪药鸡金粥可上调化疗后大鼠胃肠道Claudin-1及JAM-1紧密连接蛋白水平，但对Occludin及ZO-1紧密连接蛋白表达的调控作用尚不明确;其对TLR4/NF-κB信号通路中的IκBα蛋白具有一定的抑制作用，但对该通路TLR4、NF-κBp50及NF-κBp65蛋白的调控作用尚不明确。因此，尚不能明确芪药鸡金粥是否借由TLR4/NF-κB通路调控胃肠黏膜紧密连接蛋白表达，而促进大鼠化疗后胃肠黏膜损伤的恢复。
　　2、芪药鸡金粥能在一定范围内修复大鼠化疗后胃肠道损伤症状，对改善化疗后大鼠脾气虚症状及体重状况具有积极意义。
　　3、不同剂量芪药鸡金粥与相关指标的量效关系尚不明确，仍需进一步研究探讨。

目录

声明

摘要

引言

实验材料

1 实验条件

2 实验动物

3 实验试剂

4 实验设备

5．1 药膳组方

5．2 药膳的制作

5．3 白粥的制作

实验方法

1 实验动物分组

1．1 分组情况

1．2 随机分组法

2 实验具体方案

3 实验技术

3．1 喂食喂水方法

3．2 腹腔注射造模技术

3．3 灌胃方法

3．4 实验标本的采集

4 实验指标检测方法

4．1 应用ELISA检测通路及紧密连接蛋白的表达

4．2 制作胃及回肠组织HE染色病理切片

5 实验指标评价

5．4 脾气虚症状评分

5．5 体重

6 实验数据统计分析方法

6．1 TLR4／NF-κB通路蛋白及肠道紧密连接蛋白

6．2 大鼠胃、回肠组织病理损伤评分

6．3 脾气虚症状评分、体重

7 实验路线图

研究结果

1 芪药鸡金粥对大鼠肠道紧密连接蛋白的影响

2 芪药鸡金粥对大鼠TLR4／NF-κB出通路蛋白的影响

3 芪药鸡金粥对大鼠胃肠黏膜损伤的影响

4 芪药鸡金粥对大鼠脾气虚症状的影响

5 芪药鸡金粥对大鼠体重的影响

讨论

2 芪药鸡金粥对大鼠TLR4／NF-κB信号通路的作用

3 芪药鸡金粥对大鼠胃肠黏膜损伤的作用

4 芪药鸡金粥对大鼠脾气虚症状的作用

5 芪药鸡金粥对化疗后大鼠体重的作用

结论

局限与展望

参考文献

附录

文献综述

致谢

作者简历