复方褐藻素软膏抗实验性痤疮及THP-1细胞炎症机制的研究

摘要

目的:
　　通过家兔痤疮模型，观察复方褐藻素软膏主要成分褐藻素对痤疮炎症反应的干预效果，观察复方主要成分褐藻素、丹参酮Ⅱ A、小檗碱、黄芩苷和复方对痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌效果，同时通过Elisa、Western blot观察痤疮丙酸杆菌活菌诱导单核细胞系THP-1细胞炎症因子的表达，初步探讨复方各主要成分抗炎作用机制，从而阐明复方褐藻素软膏及其主要成分在治疗痤疮，改善痤疮炎症反应的作用机制，为进一步进行复方褐藻素软膏开发提供实验数据。
　　方法:
　　1.制备Kligman兔耳痤疮模型，造模14d，验证造模成功后，随机将实验组的9只雄性家兔随机分为A组、B组、C组，每组3只，并编号。A组涂超纯水，B组涂2％褐藻素试剂，C组涂4％褐藻素试剂，用无菌棉签均匀涂布于每只家兔耳内侧面耳导管开口处约2 cm×2 cm范围，每天1次，每次0.7 mL，并且用温水擦拭前一次的涂药部位，连续涂14d，末次涂12 h后，观察并拍照，处死，取材，制作病理切片，记录数据，并整理分析。
　　2.复方褐藻素软膏各主要成分的体外抑菌试验。选取了痤疮发生、发展过程中最常见的痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌进行体外抑菌试验，用琼脂扩散法，设置不同浓度的褐藻素、丹参酮组、小檗碱、黄芩苷和复方的受试药物溶液，分别观察不同浓度的抑菌效果，用十字交叉法测量抑菌圈，记录数据。
　　3.复方褐藻素软膏主要成分对痤疮丙酸杆菌感染THP-1细胞激活炎症因子信号通路的调控。通过Elisa、Western blot，观察活菌P.acnes刺激人源性单核细胞系THP-1细胞12h后细胞因子IL-8、TLR2、P-NF-kB p65的表达水平，初步探讨P.acnes活菌诱导THP-1细胞炎症因子的表达，进行复方主要成分丹参酮ⅡA、褐藻素防治痤疮炎症反应的机制研究。
　　结果:
　　1.制备家兔痤疮模型，在褐藻素低、高两个剂量组分别给药后，与对照组对比，给药组均有缓解痤疮症状的作用，试验提示褐藻素可以减少家兔痤疮模型炎症反应，并具有一定的剂量依赖性。
　　2.用琼脂扩散法，设置不同浓度的褐藻素、丹参酮Ⅱ A、小檗碱、黄芩苷和联合组，分别观察不同浓度的抑菌效果，用十字交叉法测量抑菌圈直径，并拍照，记录和分析试验结果，试验结果提示复方褐藻素软膏各主要成分在不同浓度时，对痤疮丙酸杆菌和金黄葡萄球菌均呈现不同程度的抑制作用。
　　3.通过Elisa、Western blot的实验方法推断复方主要成分对痤疮丙酸杆菌诱导THP-1细胞炎症因子表达及其抗炎作用机制。痤疮丙酸杆菌刺激后，THP-1细胞的IL-8分泌量明显升高;与单纯的痤疮丙酸杆菌诱导组对比，褐藻素、丹参酮ⅡA给药明显抑制了痤疮丙酸杆菌诱导后THP-1细胞内TLR2、P-NF-kB p65、IL-8的表达。
　　结论:
　　1.褐藻素的高、低剂量组可以改善家兔痤疮模型角质化，改善炎症症状，表明复方褐藻素具有防治痤疮和改善其炎症反应的作用。
　　2.在试验浓度内，复方褐藻素软膏及其主要成分褐藻素、丹参酮Ⅱ A、小檗碱和黄芩苷对痤疮丙酸杆菌和金黄葡萄球菌均有不同程度的抑菌作用。
　　3.通过对不同浓度的复方褐藻素软膏主要成分对痤疮丙酸杆菌诱导THP-1细胞TLR2、P-NF-kB p65、 IL-8蛋白表达的影响，褐藻素和丹参酮ⅡA可能是通过直接抑制P.acnes活菌诱导的IL-8分泌量和通过阻断TLR/NF-kB这对信号通路，来抑制痤疮的炎症反应。

目录

声明

英文缩略语

摘要

前言

第一章 痤疮模型的制备及褐藻素抗实验性痤疮试验

1 引言

2 试验材料

2．1 试验动物及饲料

2．2 试验仪器

2．3 试验试剂

2．4 试剂的配制

3 试验方法

3．1 动物分组、造模与干预

3．2 观察指标

3．3 造模及干预结果评价

4 试验结果

4．1 肉眼观察：一般情况

4．2 病理组织学观察

5 讨论

5．1 痤疮模型的建立

5．2 复方主要药物的筛选

5．3 外用剂型

第二章 复方褐藻素软膏及组分对痤疮丙酸杆菌、金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验

1 引言

2 试验材料

2．1 试剂验菌种及培养基

2．2 试验仪器

2．3 试剂与药品

2．4 试剂的配置

3 试验方法

4 试验结果

4．1 不同浓度的丹参酮ⅡA对受试菌种的抑菌效果

4．2 不同浓度褐藻素对痤疮丙酸杆菌的抑菌效果

4．3 不同浓度小檗碱对受试菌种的抑菌效果

4．4 不同浓度黄芩苷对受试菌种的抑菌效果

4．5 不同浓度的联合组对受试菌种的抑菌效果

5 讨论

第三章 复方褐藻素软膏主要成分对THP-1细胞炎症信号通路的调控

1 引言

2 试验材料

2．2 试验仪器

2．3 试验药品及试剂

3 试验方法

3．1 溶液配置

3．2 P．acnes的培养

3．3 诱导炎症细胞

3．4 干预

3．5 Elisa法检测THP-1中Human IL-8含量的试验步骤

3．6 目的蛋白样品的制备和Western blot的试验步骤

3．7 统计方法

4 试验结果

4．1 Elisa法检测细胞THP-1中Human IL-8的含量

4．2 Western blot检测目的蛋白表达结果

5 讨论

结论

参考文献

附录

文献综述 中药抗痤疮及抑菌实验的研究进展

致谢

作者简历