基于TGF-β1/Smad3信号通路研究桃核承气汤对CRF大鼠肾间质纤维化中miR-29表达的影响

摘要

目的：通过观察桃核承气汤对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾间质纤维化TGF-β1/Smad3信号通路介导的miR-29表达的影响，分析该方延缓CRF的可行性，为治疗CRF提供分子生物学依据。
　　方法：将100只7周龄成年雄性Wistar大鼠适应性喂养1周后，随机分成四组(n=25)，分别命名为空白组、假手术组、模型组、治疗组。模型组与治疗组的大鼠均采用5/6肾切除手术的方式造模，在水合氯醛的麻醉下切除大鼠左肾2/3的肾组织。一周后进行第二次手术，切除大鼠右侧肾组织;假手术组的大鼠只剥除两肾的被膜;空白组不做处理。术后3天连续腹腔注射青霉素以预防感染。各组均在造模完成后喂养4周，4周后每天上午对每组大鼠进行灌胃(10ml/Kg·d)：空白组、假手术组和模型组大鼠使用生理盐水灌胃;治疗组用桃核承气汤灌胃，连续灌胃56天后处死，腹主动脉取血用于检测大鼠RBC、Hb、Scr、BUN;取左肾组织，一部分肾组织置于冻存管中，行Western Blot法检测左肾组织TGF-β1、Smad3的蛋白含量;Real-Time PCR检测TGF-β1、Smad3mRNA和miR-29a、miR-29b、miR-29c的表达情况;另一部分肾组织存放于多聚甲醛中，经处理后用光镜观察各组肾组织的病理情况并采集图片以对比各组变化。
　　结果：模型组、治疗组与空白组、假手术组对比，RBC、Hb的含量明均有不同程度的降低(P＜0.05)，血清SCr、BUN则有不同程度的升高（P＜0.05），治疗组与模型组相比结果有统计学意义。Western Blot结果显示，治疗组相比模型组，左肾组织TGF-β1、Smad3的蛋白表达显著下降(P＜0.05);Real-Time PCR示治疗组相比模型组，TGF-β1、Smad3mRNA表达下调(P＜0.05)，miR-29a、miR-29b、miR-29c表达水平上调(P＜0.05);光镜下肾间质纤维化明显HE染色显示，空白组及假手术组左肾组织结构正常;模型组左肾组织结构紊乱，间质纤维增生严重，肾小管萎缩，可见炎性细胞浸润;治疗组与模型组相比较，肾间质中炎性浸润减少，间质纤维化程度明显改善。
　　结论：1.桃核承气汤可以有效改善CRF大鼠的肾性贫血状态;明显降低CRF大鼠的血肌酐、尿素氮含量而有效改善慢性肾功能衰竭大鼠的肾功能;可以保护CRF大鼠肾单位延缓慢纤维化的进展;2.5/6肾切除大鼠肾间质纤维化模型中TGF-β1/Smad3信号被激活;3.桃核承气汤能通过抑制5/6肾切除大鼠肾间质纤维化模型中TGF-β1/Smad3信号，上调miR-29的表达。

目录

声明

英文缩略词中英文对照表

摘要

引言

第一部分 理论研究

1 现代医学对CRF的研究

1．1 CRF发生的病理机制

1．2 肾间质纤维化在CRF进展中的重要意义

1．3 肾间质纤维化的机制研究

2 CRF的中医研究

2．1 CRF的中医病名

2．2 CRF的中医病因

2．3 CRF的中医病机

2．4 CRF的分期辨证论治

2．5 中医药治疗CRF的现代研究

第二部分 实验部分

1 实验材料

1．1 实验动物

1．2 实验药品

1．3 主要实验试剂

1．4 主要实验设备

2 实验方法

2．1 分组与造模

2．2 灌胃给药

2．3 观察内容

2．4 标本采集

2．5 检测方法

2．6 统计方法

3 实验结果

3．1 一般情况观察

3．2 肾脏的肉眼观察

3．3 实验室检测指标

3．4 Western blot检测结果

3．5 Real Time PCR结果

第三部分 分析与讨论

1 桃核承气汤治疗CRF的立法依据

1．1 桃核承气汤证与CRF病机切合

1．2 桃核承气汤治疗CRF的作用机制

2 桃核承气汤抗CRF大鼠肾间质纤维化的作用机理

2．1 桃核承气汤对CRF大鼠RBC、Hb的影响

2．2 桃核承气汤对CRF大鼠血Scr、BUN的影响

2．3 桃核承气汤对CRF大鼠肾脏组织形态的影响

2．4 桃核承气汤对TGF-β1／Smad3信号调控的的miR-29的表达的影响

3 不足与展望

结论

参考文献

附录

文献综述 中药复方治疗慢性肾纤维化的研究进展

致谢

作者简历