中缅边境间日疟原虫青蒿琥酯敏感性研究

摘要

目的：调查中缅边境间日疟原虫青蒿琥酯敏感性及敏感性程度与其可能相关分子标志物Pvcrt-o、Pvmdr1基因多态性的关系。
　　方法：(1)采集疟疾患者血样，将经过镜检和PCR鉴定确认为间日疟病人血样进行短期体外培养后，用微量法检测间日疟原虫对青蒿琥酯的药物敏感性，并计算各间日疟原虫样本的青蒿琥酯IC50值。（2）采用PCR扩增间日疟原虫转运蛋白（Pvcrt-o）基因片段、产物测序，与野生型Pvcrt-o基因（AF314649）进行比对，分析其多态性。（3）比较Pvcrt-o、Pvmdr1各突变型样本青蒿琥酯IC50值与野生型样本青蒿琥酯IC50值的差异。
　　结果：(1)37例中缅边境间日疟原虫青蒿琥酯IC50值分布于0.1196-11.0300 nM区间，其95％置信区间（95%CI of geo. Mean，95%CI）为2.172-4.271 nM，IC50的几何均数（Geometric mean）为3.045 nM，中位数（Median）为3.468 nM，高于文献报道的印度尼西亚、韩国、中国中部间日疟原虫青蒿琥酯IC50值。(2)上述37例间日疟原虫青蒿琥酯敏感性检测样本Pvcrt-o基因PCR扩增并测序成功后，经与野生型Pvcrt-o基因（AF314649）比对分析，发现5例携带R317W突变，突变率为14%；3例携带E299K突变，突变率为5.4%；1例携带G298E突变，突变率为2.7%；1例携带S279C突变，突变率为2.7%。(3) Pvcrt-o基因W317突变型间日疟原虫样本青蒿琥酯IC50值与R317野生型间日疟原虫样本的青蒿琥酯IC50值之间无显著差异（P>0.05）。K299突变型间日疟原虫样本的青蒿琥酯IC50值与E299野生型样本的青蒿琥酯IC50值之间亦未见显著差异（P>0.05）。（4）根据本课题组前期对这些进行青蒿琥酯敏感性测定间日疟原虫样本Pvmdr1基因测序结果，在成功进行Pvmdr1基因测序的22例样本中， F976突变型样本的青蒿琥酯IC50值与Y976野生型样本的IC50值之间无显著差异（P>0.05），L1076突变型样本的青蒿琥酯IC50值与F1076野生型样本的青蒿琥酯IC50值之间无显著差异（P>0.05），F976、L1076双突变型样本的青蒿琥酯IC50值与野生型样本的青蒿琥酯IC50值亦无显著性差异（P>0.05）。
　　结论：(1)中缅边境地区的间日疟原虫对青蒿琥酯存在敏感性下降的迹象。(2)发现中缅边境地区间日疟原虫Pvcrt-o基因存在R317W、E299K、G298E和S279C四种突变。(3)未发现中缅边境的间日疟原虫对青蒿琥酯的敏感性程度与Pvcrt-o基因R317W突变、E299K突变和pvmdr1基因Y976F单突变、F1076L单突变及Y976F、F1076L双突变相关。

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引言

材 料 与 方 法

1. 实验材料

2. 实验方法和步骤

4、统计学处理

结果

1. 中缅边境体外青蒿琥酯敏感性测定结果

2.Pvcrt-o基因PCR扩增结果

3.PCR扩增产物测序结果

4.Pvcrt-o基因多态性分析结果

5.青蒿琥酯IC50值与Pvcrt-o基因多态性的相关性

6.青蒿琥酯IC50值与Pvmdr1基因多态性的相关性

讨论

结论

参考文献

致谢

附录A 英中文术语和缩略词对照表

附录B 常用试剂配制方法

附录C 个人简历、 已发表论文及待发表论文

附录D 综述:恶性疟原虫青蒿素耐药性研究进展