ABCA1、SR-BI基因多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病的关联研究及对胆固醇逆向转运功能影响的机制探讨

摘要

目的：1.研究分析冠心病患者的传统危险因素、脂类代谢情况、冠状动脉病变特点；2.研究冠心病患者中ABCA1 gene promoter-565CT和7exon R219K以及SR-BIlexon基因多态位点的遗传学分析；3.比较不同基因型冠心病患者外周血原代单核细胞来源的巨噬细胞ABCA1的表达及ABCA1介导的细胞内胆固醇外流功能，探讨冠心病患者巨噬细胞内胆固醇沉积的分子生物学机制。 方法：1.基因遗传学研究；1.1本研究收集2007年1月至2008年4月在北京协和医院心内科及阜外心血管病医院心内科经冠脉造影确诊的冠心病患者516例，对照组为同期协和医院体检无冠心病、糖尿病和血脂异常的正常人544例。收集血糖血脂等传统危险因素及冠状动脉病变资料，所有研究对象均为汉族。1.2在基因水平，主要采用先进的高灵敏度连接酶检测反应法(LDR)测序，以检测片断长度多态性(RFIP)和直接测序(DS)为辅助方法对所有研究对象ABCA1 promoter-565C/T、7exon R219K及SR-BI lexon三位点突变情况进行遗传学分析。1.3进行各种基因多态性与临床资料进行相关性分析。2 ABCA1介导的细胞内胆固醇外流的研究；2.1在mRNA水平，采用实时荧光定量反转录PCR方法研究ac-LDL诱导单核细胞巨噬泡沫化后对ABCA1-565C/T不同基因型表达水平的影响。2.2在蛋白水平，采用Western Blot和ELISA方法测定ac-LDL诱导单核细胞来源的巨噬细胞泡沫化后ABCA1和SR-BI蛋白表达的变化。2.3在细胞水平，人外周血单核细胞原代培养及诱导巨噬泡沫化，并用3H放射性同位素标记胆固醇，研究不同基因型患者的巨噬细胞来源泡沫细胞ABCA1介导的胆固醇外流。3 统计方法：计算等位基因频率，做H-W平衡，构建单体型，所有分析应用SPSS13.0及专业遗传学软件。 结果：1.ABCA1和SR-BI基因遗传学研究：1.1冠心病组与对照组比较：年龄62±11岁，无显著差异，男性占74％多于对照组，总胆固醇4.46±1.03mmol/L；LDL 2.58±0.85 mmol/L；TG 1.86±1.54mmol/L明显升高；HDL1.58±0.53 mmol/L；and ApoA 1.25±0.22g/L明显降低P均<0.05；1.2 ABCA1-565 TT基因型及T等位基因频率在冠心病及对照组无显著差异(0．1627 vs 0．1625；0．404 vs 0．414，P>0．05)；1.3 ABCA1 R219K AA基因型+GA基因型频率CAD合并糖尿病组低于正常对照组(0．65 vs 0．73，P=0．079)；1.4 冠心病组与对照组相比ABCA1的-56C／T与R219K两位点构成单倍型频率无显著差异；1.5 包括传统危险因素、-565C／T、R219K两基因位点以及两基因位点交互作用在内的的Logistic回归分析显示，R219K位点AA基因型与冠心病发病显著相关(OR=0．428，95％CI 0．227-0．306，P=0．009)，系保护性作用。上述两基因位点无交互作用；1.6 冠心病组心梗患者中ABCA1-565TT基因型比例较高，P=0．09，且在前壁心梗和多部位心梗患者TT基因型比例较高，P=0．007；1.7 冠心病组ABCA1-565各基因型及R219K各基因型的HDL水平无显著差异P>0．05；1.8 在本研究汉族人群中，SR-BI lexon基因突变率极低0．23％。2．体外细胞学培养实验：2.1 单核细胞原代培养分化成巨噬细胞，经ac-LDL诱导成泡沫细胞；2.2 本研究显示荧光定量RT-PCR在巨噬细胞的mRNA检测中是一个敏感的测定方法；2.3 ABCA1-565TT型巨噬泡沫细胞胆固醇流出率低于C／T型和CC型；2.4 Real-time RT-PCR结果显示TT基因型巨噬细胞在无诱导和诱导后ABCA1mRNA表达较其他基因型显著增强，P<0．05；TT型诱导后ABCA1mRNA表达自身比较下降有显著差异，P=0．001；2.5 TT型巨噬细胞中ABCA1蛋白表达显著低于C／T。型和CC型，TT型诱导后ABCA1mRNA表达自身比较仅呈现下降趋势，P=0．059。 结论：⑴在中国汉族人群中，ABCA1promoter-565 T等位基因突变与CAD无显著相关；但冠心病患者人群内部分析结果提示TT型冠心病病情严重。⑵ABCA1 7exon R219K AA基因型和A等位基因系冠心病发病保护性因子。⑶SR-BI Gly4Ser在人群突变率极低。⑷ABCA1-565C／T位点TT基因型ABCA1的蛋白表达及胆固醇外流功能较CC、CT型减低，推测是TT基因型通过影响巨噬细胞RCT功能而促进冠心病发生发展。

目录

论文说明:缩写词表

第一部分：ABCA1 promoter-565C/T、7 exon R219K及SR-BI 1 exon Gly4Ser多态位点基因遗传学研究

前 言

实验材料

一、冠心病临床资料收集

实验方法

实验结果

二、ABCA1-565C/T、R219K，SR-BI Gly4Ser基因遗传学部分

实验方法

实验结果

讨 论

创新及局限性：

结论

参考文献：

第二部分冠心病人外周血单核细胞诱导巨噬泡沫细胞ABCA1表达及其介导的RCT功能研究

前言

实验材料

实验方法

实验结果

讨 论

创新、局限性与展望

结 论

参考文献：

综述 高密度脂蛋白介导的胆固醇逆向转运功能相关基因的多态性与冠心病和血浆HDL浓度的关系

致谢

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