贵州不同生境土壤中微生物结构的差异

摘要

从贵州不同生境中采集土壤,先对ZY01、ZY02、ZY03号土壤测定水分和pH值,结果分别为21.2%、19.9%、17.7%和6.5、6.5、6.0.然后进行了以下研究:(一)用土壤浸出液培养基、牛肉膏蛋白胨培养基;马铃薯培养基(PDA);高氏一号合成培养基进行三大微生物(细菌、真菌和放线菌)的分离培养并进行观察计数,结果在不同培养基上都有细菌、真菌和放线菌的生长,但生长状况有差异:用牛肉膏蛋白胨培养基和土壤浸出液培养基培养,结果ZY01、ZY02、ZY03号土壤每克干土含细菌数各自为5.0×107、3.0×10<'7>、1.0×10<'7>,/、9.0×10<'7>、1.0×10<'7>;PDA培养每克干土含真菌数各自为3.0×10<'4>、1.5×10<'4>、2.5×10<'4>;高氏一号培养基的培养每克干土含放线菌数各自为1.1×10<'6>、7.5×10<'5>、8.0×10<'5>.(二)采得的土壤经烘干或低温真空冷冻干燥后,研磨成粉状,然后分别用三种方法从研磨后的土壤中提取总DNA,除S02土壤外,都提取到了DNA,但提取效率有所不同:每克干土提得的DNA为2.5 μg~31μg不等,最高的是用二号方法从ZY02提取的DNA,最低的是用三号方法从ZY02提取的DNA;以二号方法获得的粗制DNA纯度较高.(三)用北京鼎国生物技术公司生产的基因组DNA纯化试剂盒对第一种方法提取的粗制DNA进行纯化,然后PCR扩增16S rDNA序列.

目录

第一部分文献综述

1土壤微生物的分离培养

1.1土壤细菌的分离培养与计数

1.2土壤真菌的分离培养与计数

1.3土壤放线菌的分离培养与计数

2土壤DNA的提取

2.1直接提取法

2.2间接提取法

2.3直接法和间接法的比较

2.4结论

第二部分引言

1研究目的与意义

2研究目标

3研究内容

4研究技术路线

第三部分材料与方法

1材料、试剂及仪器

2方法

2.1土壤的采集、处理和保存

2.2从土壤中分离培养微生物

2.3土壤中微生物数量的测定

2.4微生物菌落识别要点

2.5土壤细菌DNA的提取方法

2.6用分光光度法测OD260、OD280，估计DNA的纯度和每克干土中DNA的含量

2.7粗制DNA的纯化

2.8PCR扩增16SrDNA

2.9琼脂糖凝胶电泳分析

第四部分结果与讨论

1土壤水分含量和pH值

2土壤微生物培养

2.1细菌

2.2真菌

2.3放线菌

3土壤DNA的提取

第五部分结论

参考文献

致谢