猪支原体重组MSG1蛋白间接ELISA检测方法的建立

摘要

为确定猪支原体在临床的感染情况和进行血清流行病学调查，本研究以原核表达纯化的猪支原体MSG1重组蛋白为包被抗原，建立了检测猪支原体的间接ELISA诊断方法。通过对ELISA反应一系列条件的优化，确定了最佳抗原包被浓度为0.5μg/mL；最佳封闭条件为用1%BSA37℃温箱内封闭2h；血清最适稀释度为1:200，作用时间为1.5h；酶标二抗最适稀释度为 1:15000，最适作用时间为1h；最后37℃显色15min。判定标准为OD450≥0.239时判为阳性，OD450<0.198时判为阴性，0.198≤OD450<0.239时判为可疑。敏感性、特异性和可重复性试验证明，该检测方法敏感性高、特异性强和可重复性好。该研究表明建立的间接ELISA方法为猪支原体的检测和区域流行病学调查提供了一种快速简便的血清学诊断方法。