鼻气管鸟杆菌间接ELISA检测方法的建立及应用

摘要

提取A型鼻气管鸟杆菌(ORT)外膜蛋白，经纯化后包被反应板，通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、兔抗鸡酶标二抗稀释倍数，建立了检测ORT抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定确定最佳抗原包被浓度为11．85μg/mL，血清样品稀释倍数为1：20，兔抗鸡IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释倍数为1：1000，抗原抗体最佳结合时间为1h，血清与二抗最适反应时间为45 min。试验结果确定的判定标准为：样品OD490nm≥0．639判定为阳性，OD490nm≤0．350判定为阴性，介于二者之间的为可疑。试验证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性，将205份疑似ORT的鸡血清用本方法进行检测，其阳性检出率为11．7％(24／205)。该研究为ORT的诊断提供了一种敏感性高、特异性强、简便、易行的方法。