乳胶凝集检测法检测鳗鲡致病菌的研究

摘要

鳗鲡(Anguilla sp．)是中国重要的养殖经济鱼类，自70年代末以来，很快发展成为中国出口创汇最多的单项水产品之一。目前中国大陆的主要养殖品种有日本鳗鲡、欧洲鳗鲡和美洲鳗鲡。随着养殖集约化程度的提高，养殖环境日益恶化，鳗鲡病害成为困扰鳗鲡养殖业持续、健康发展的重要因素，尤其是细菌性病害，发病广、传播快、死亡率高，给鳗鲡养殖业者造成了巨大的经济损失。因此，快速的诊断疾病是有效防治的关键。在前期的研究工作中，我们采用玻片凝集法检测鳗鲡常见致病菌，但是存在结果判断难，灵敏度低等问题。基此，本试验在玻片凝集试验的基础上探讨建立乳胶凝集法检测鳗鲡常见致病菌。首先采用A蛋白亲和层析纯化获得鳗鲡致病菌的多克隆抗体，设计了不同偶联时间、抗体载量、致敏时间和封闭时间等条件对乳胶进行致敏效果对比试验，结果表明：碳化二亚胺(EDC)偶联3h，抗体量为500μg/ml，25℃、200r/min致敏10h，然后加入甘氨酸于25℃、200r/min封闭30min，所得致敏乳胶抗体与对应抗原反应效价最高，抗原检测灵敏度最高，达到1×10%fu/ml，较直接玻片凝集法提高约10倍，且特异性强，重复性好，4℃保存4个月效价不变，室温保持1个月效价不变。乳胶凝集试验方法较直接玻片凝集法检测灵敏度高，更适于鳗鲡致病菌的快速检测。