菊花cDNA-AFLP分析体系的建立及应用

摘要

本研究以菊花品种'神马'为材料,对影响其cDNA-AFLP分析体系的几个关键因素进行了探索和分析,建立了适于菊花的cDNA-AFLP分析体系.结果表明:TRNzol法提取的RNA较完整,纯度较高;采用Oligo(dT)18 Primer及经过改造和优化的BeyoRT M-MuLV反转录酶得到ds cDNA,将1μg的cDNA利用EcoR Ⅰ/Mse Ⅰ快速双酶切5 min,连接产物稀释10倍作为预扩增反应的模板,扩增30个循环,其检测结果较理想;预扩增产物稀释50倍作为模板,采用Touchdown程序,选用64对AFLP引物进行选择性扩增;扩增产物经6％的PAGE电泳后采用改进的快速银染体系,筛选出多态性条带丰富的AFLP引物49对,并得到了清晰可辨的cDNA-AFLP凝胶图谱.本研究建立的反应体系适用于菊花功能基因的cDNA-AFLP研究.