携带脂肪酸去饱和酶Fatl-Fat2双基因打靶载体及其表达与功能鉴定

摘要

本研究克隆得到猪体内缺乏的ω-3和△-12脂肪酸去饱和酶的关键基因FAT1与FAT2，经密码子优化后，构建了携带FAT1-FAT2双基因的多位点打靶载体。该载体以猪γRNA基因间的内部转录间隔序列为靶位点;为提高定点整合效率，引入NEO、TK正负筛选系统进行双重选择;加入EGFP报告基因和CrelLoxp系统，便于对阳性同源重组细胞克隆进行筛选和后期将筛选基因进行删除。将构建完好的打靶载体在细胞水平上验证基因的表达与功能鉴定。