鸡堆型艾美耳球虫Hsp90克隆表达及其核酸疫苗的免疫保护作用

摘要

鸡球虫是由包括堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)在内的7种常见艾美耳球虫引起的一种寄生虫病.寄生虫侵入鸡肠道组织并分裂增殖使其发生损伤而导致腹泻、血便和体重降低,对养禽业造成严重的经济损失.基于球虫抗药性和药物残留的问题,研制安全而有效的基因工程疫苗用于鸡球虫病的防治成为热点.Hsp90家族是分子大小质量81-99Ku的一种进化保守的蛋白质,它在分子伴侣功能、细胞循环调控、抗原传递方面发挥着重要作用,已有研究表明其在多种寄生虫生长发育过程中发挥重要的作用.本研究构建pVAX-Hsp90重组真核质粒，将其在体外瞬时转染Hela细胞进行IFA检测，结果显示Hsp90可在体外成功表达，并将构建的重组真核质粒免疫雏鸡后进行攻虫保护实验，共分为4个组，未免疫未攻虫组（N组）、PBS注射攻虫组（P组）、pVAX1质粒注射组（E组）、pVAX-Hsp90免疫组（H组），实验组分别以100μL/鸡的PBS或100μg/鸡的pVAX1、pVAX-Hsp90剂量于14d和21d胸部肌肉注射免疫雏鸡，在二次免疫后每只鸡口服接种1×105孢子化卵囊，通过观察增重情况、十二指肠病变计分、OPG及抗球虫指数，对不同处理组雏鸡的各项免疫指标进行了检测，用以评价真核表达质粒的免疫效果，结果表明pVAX-Hsp90组较空载体组及PBS组增重明显（p<0.01），且肠道病变减轻，OPG减少，抗球虫指数为166.17。综上初步评价了Hsp90核酸疫苗的免疫保护作用，表明Hsp90是一种潜在的鸡球虫保护性抗原。