鸡堆型艾美耳球虫乳酸脱氢酶增强型核酸疫苗构建和免疫保护研究

摘要

本试验根据GenBank发表的堆型艾美耳球虫(Eimeiria acervulina)乳酸脱氢酶(LDH)基因序列设计引物,成功克隆上海株堆型艾美耳球虫的部分LDH基因,大小为993bp.构建LDH的原核表达质粒,表达大小为42KDa的LDH重组蛋白,切胶纯化后免疫新西兰白兔,制备兔抗LDH多克隆抗体.经Western blot和间接免疫荧光试验证明制备的多克隆抗体具有良好的反应性.利用一段编码(G4S)3多肽的碱基linker序列将LDH和ChIL-18基因进行连接,成功构建了一个融合基因真核表达载体质粒,即PVAX-IL-18-linker-LDH质粒.融合基因质粒的体外瞬时转染试验表明表达的融合蛋白可以被LDH多克隆抗体和ChIL-18多克隆抗体检测出来,证明融合基因表达的蛋白保留了所融合的两段基因各自的生物学活性,为后续动物免疫试验提供了理论基础，结果表明，ChIL-18基因可以提高LDH基因真核表达质粒刺激机体产生细胞免疫应答，进而提高机体抵抗球虫攻击的能力。本试验为进一步研究LDH的生物学活性提供了试验依据，同时为探讨开发研制新型免疫增强型抗球虫核酸疫苗提供了理论基础。