鸡Ⅰ型IFN及TLR-3和TLR-7实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

摘要

为检测鸡抗病毒相关基因在病毒感染过程中的动态变化规律,本研究建立了鸡IFN-α、IFN-β、TLR-3和TLR-7的实时荧光定量RT-PCR的检测方法.根据Genbank提供的鸡IFN-α、IFN-β、TLR-3和TLR-7参考序列设计了相应的特异引物,用常规RT-PCR方法从鸡脾脏总RNA中扩增得到鸡相应基因.将其eDNA分别克隆到pMD19-T载体中进行测序鉴定,采用SYBR Green Ⅰ染料法,建立标准曲线并分析其熔解曲线.结果表明这四种基因的检测灵敏度可高达46 copies/μL,且具有良好的特异性和重复性.此检测方法的建立为动态定量检测及研究鸡IFN-α、IFN-β、TLR-3和TLR-7基因的表达变化提供了有效的手段.