ETEC菌毛蛋白K88抗体PPA-ELISA检测方法的建立

摘要

以纯化的大肠埃希菌K88菌毛蛋白为包被抗原，建立了检测大肠埃希菌K88 IgG抗体的间接ELISA方法。确定了间接ELISA的最适反应条件，即最佳抗原包被浓度为1μg／mL，兔抗体稀释倍数为1：10，猪抗体稀释倍数为1：100，确定最佳封闭液为5％脱脂奶粉，最佳封闭时间为0.5h，血清反应时间时间0.5h，二抗反应时间1h，底物室温反应时间为15min，阴阳性临界值兔血清为0.33、猪血清为0.4 5。试验证实该间接PPA-ELISA方法的特异性强、重复性好、敏感度高，可以作为疫苗效力检验和流行病学调查的参考方法。