表达犬细小病毒VP2基因的重组狂犬病病毒生物学特性研究

摘要

目的：研究表达犬细小病毒VP2基因的重组狂犬病病毒生物学特性。方法：将本课题组构建成功的重组狂犬病病毒rHEP-Flury(vP2-3.0)、rHEP-F1ury(dG-VP2)进行基因鉴定和G蛋白、VP2蛋白表达的鉴定，并比较两株重组病毒与亲本株rHEP-Flury3.0的生长特性，免疫原性及攻毒保护。结果：通过RT-PCR方法可检测到双G基因和VP2基因，并且在第20代仍然没有丢失;通过Western-blotting可检测到rHEP-Flury(VP2-3.0)、rtlEP-Flury(dG-VP2)G蛋白的表达，其分子量大小与亲本株基本一致;通过问接免疫荧光方法检测到rHEP-Flury(VP2-3.0)、rHEP-F1ury(dG-VP2)的VP2蛋白在细胞包浆中表达;病毒的一步生长曲线表明rHEP-Flury(VP2-3.0)和rHEP-Flury(dG-VP2)与亲本株rHEP-Flury 3.0相比较生长特性基本一致，并且fltEP-Flury(VP2-3.0)和rHEP-F1ury(dG-VP2)在第4天的滴度均高于亲本株。免疫原性试验和攻毒保护试验表明重组狂犬病病毒rHEP-Flury(VP2-3.0)和rHEP-Flury(dG-VP2)免疫小鼠后均能诱导产生较高的抗狂犬病病毒抗体与抗犬细小病毒抗体水平，用狂犬病标准攻毒毒株CVS-11进行攻毒保护试验小鼠可获得80S以上的存活率。结论：重组狂犬病病毒rHEP-Flury(VP2-3.0)、rHEP-Flury(dG-VP2)具有作为新型疫苗的潜质，本研究为犬的新型多价基因工程疫苗的研制莫定了基础。