表达猪H1N1亚型流感病毒三聚体HA的重组慢病毒包装

摘要

目的:包装融合表达HA-GCN4pⅡ的重组慢病毒。方法:RT-PCR扩增猪H1N1流感病毒HA基因，以GS-linker使HA与GCN4pⅡ连接。构建慢病毒蛋白表达系统，通过观察荧光、病毒转导效率、SDS—PAGE、Western blot验证重组慢病毒包装和HA-GcN4pⅡ融合蛋白表达情况。该系统能使外源基因得到持久和稳定的表达。结果:包装获得能够融合表达HA—GCN4pⅡ的重组慢病毒LV-HA-GCN4pⅡ，病毒滴度为1．1×106 TU／ml;LV-HA-GCN4pⅡ能有效转导293T细胞。结论:本实验成功构建了表达HA-GCN4pⅡ融合蛋白的慢病毒表达载体，获得的重组慢病毒不仅为后续动物试验测定其诱导的体液免疫和细胞免疫水平奠定了基础，同时也为研制猪H1N1亚型流感疫苗做出了有益尝试。