猪细小病毒体外培养适应毒株(HJ)的培育及动物感染试验

摘要

从初产母猪流产胎儿的肠系膜淋巴结中分离到一株猪细小病毒(PPV)，采用无污染的猪睾丸传代细胞系(ST)对该毒株传代，培育成一株细胞适应毒株，命名为PPV-HJ毒株。该毒株经ST细胞连续传50代，于第25代起毒价显著提升，第40代毒价维持稳定(107．2 TCID50／mL)。采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验(IPMA)检测表明，该病毒感染细胞后病毒抗原主要分布在细胞核中，病毒感染的阳性细胞染成棕红色。免疫电镜观察到PPV粒子与抗体结合形成的免疫复合物，呈实心小颗粒样粒子，直径约21 nm。经病毒基因克隆测序证实，该毒株的NS1基因序列与GenBank中PPV-ZJ毒株同源性最高，达98．41%。用该毒株第50代培养物(1×107．2 TCID50／mL)接种35日龄仔猪，临床未表现明显症状，迫杀后未观察到明显病理学变化，PCR法在猪的肺脏、扁桃体、腹股沟淋巴结、颌下淋巴结、小肠中检测到病毒核酸，表明该毒株对靶动物具有一定的感染性，但毒力随传代而明显减弱趋势。本研究成功地培育出一株体外细胞培养适应毒株，其繁殖性能稳定，为今后开展PPV与猪圆环病毒2型(PCV2)混合感染的协同致病性研究，以及联合疫苗的创制奠定了基础。