转蜘蛛拖丝蛋白基因逆转录病毒载体构建与检测

摘要

目的：为了建立通过动物被毛获取蜘蛛拖丝蛋白的方法,本研究利用pIRES2-EGF和PMX载体以及前期获得的蜘蛛拖丝蛋白基因(2S),构建逆转录病毒载体PMX-2S-IRES-EGFP.方法：采用磷酸钙法将PMX-2S-IRES-EGFP质粒转染到PlatE细胞并获得重组逆转录病毒.通过小鼠成纤维细胞系NIH3T3检测病毒侵染能力,并采用PCR法检测蜘蛛拖丝蛋白基因在NIH-3T3细胞的整合状况.结果：其结果,成功构建了逆转录病毒载体PMX-2S-IRES-EGFP;通过感染NIH-3T3细胞测定重组逆转录病毒滴度约为2×105cfu·mL-1; PCR鉴定结果显示,目的基因2S-IRES-EGFP已整合入NIH-3T3细胞基因组中.结论：上述结果为进一步开展通过逆转录病毒转基因法获得表达蜘蛛拖丝蛋白的转基因动物奠定基础.