Myxococcus fulvus HW-1和Myxococcus xanthus DK1622中nhaA基因的鉴定及功能差异

摘要

为鉴定Myxococcus fulvus HW-1和Myxococcus xanthus DK1622中2个蛋白的NhaA功能，将MXAN_6055基因和MFUL_6055基因克隆到3个主要的nha基因(nhaA,nhaB和chaA)均缺失的E.coli KNabc中，发现2个同源基因均能回补E.coli KNabc一定的耐盐能力。对这2个同源基因进行经典的翻转膜实验，发现其钠离子转运活性非常低，结合Western blot的实验结果，推测这一结果是MXAN_6055基因和MFUL_6055基因在E.coliKNabc中表达水平过低造成的。荧光定量PCR实验显示，Na+可能对MXAN_6055/MFUL_6055基因的表达有诱导作用，但仍需进一步实验验证。另外，由于M.fulvus HW-1没有建立成熟的遗传操作体系，通过融合PCR技术，将MFUL_ 6055基因置换到了M.xanthus DK1622中，以对比分析该基因对粘细菌多细胞行为能力的影响。对该突变株的初步分析结果显示，MFUL_6055基因可能影响粘细菌的子实体形成能力。