猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒的研制

摘要

目的:建立检测猪瘟病毒(CSFV)抗体的单抗阻断ELISA方法,并研制生产出检测猪瘟病毒抗体的ELISA试剂盒,为猪瘟病毒抗体的监测提供帮助.rn 方法:利用杆状病毒系统表达猪瘟病毒的E2蛋白,经亲和层析柱纯化后将该蛋白免疫BALB/c小鼠,运用细胞融合技术获得杂交瘤细胞,获得了稳定分泌抗E2蛋白单抗的细胞株,用亲和层析法纯化抗E2蛋白单克隆抗体,并标以辣根过氧化物酶,再以E2蛋白包被微量反应板,采用阻断ELISA方法确定抗原的最佳包被浓度和血清稀释度,优化各项实验条件,在此基础上研制ELISA检测试剂盒,并对试剂盒的特异性、重复性等方面进行了研究.rn 结果:经过研究确定抗原包被浓度为0.69μg/ml,待检血清最佳稀释度为1:4,稳定性试验表明批内变异系数和批间变异系数均小于8％,并确定了试验体系的临界值.应用该ELISA方法和美国IDEXX猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒同时检测457份临床血清,结果显示两者总符合率达92.56％.rn 结论:该ELISA试剂盒可用于猪瘟血清学流行病调查和抗体水平的监测.