枯草芽孢杆菌purB基因表达载体的构建

摘要

应用PCR技术于腺苷生产菌枯草芽孢杆菌XGL基因组上扩增出腺苷琥珀酸裂解酶基因purB,以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的穿梭载体pBE43为基本骨架,构建了purB基因的重组表达质粒.腺苷琥珀酸裂解酶是催化合成嘌呤核苷酸起始合成与循环的唯一双功能酶,属于肌苷酸合成酶系.重组质粒经双酶切鉴定,在1500bp处出现目的条带,与预期结果相一致,并且测序结果同Genbank中的序列同源性达到100％,未发生任何突变.随后将重组表达质粒以电转的方式转化入枯草芽孢杆菌生产菌XGL,SDS-PAGE电泳结果显示出明显的特异性蛋白条带,分子量约为49.4kDa.结果表明重组表达质粒的构建成功.该质粒的构建为腺苷生产的进一步研究奠定了基础.