用高效液相色谱法分析植物中21种游离氨基酸浓度的方法研究

摘要

本文建立了植物中21种游离氨基酸浓度的自动在线柱前衍生反相高效液相色谱测定方法,测定浓度在4.5～450pmol/uL范围内的混标中21种氨基酸的精度、准确度以及线性关系良好,整个分析过程快速、准确、灵敏且重现性好,可用于高等植物叶片中游离氨基酸浓度的测定.以邻苯二甲醛(OPA)和9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)为衍生剂,经Agilent Zorbax Eclipse-AAA色谱柱分离,梯度洗脱,最后用荧光检测器检测.研磨过筛后的植物样品经超纯水超声提取,用陶氏阳离子树脂纯化,接着用超纯水淋洗树脂,淋洗结束后,用4mol/L的氨水进行洗脱,收集洗脱液并将洗脱液冷冻干燥,用四苯硼钠溶液定容到1mL,过0.22um滤头,置于样品瓶中,待上HPLC测定.对于高等植物来说，叶片中游离氨基酸含量相对较低。前人对植物中氨基酸的研究主要集中在针叶、藻类等植物上，这是因为阔叶植物中色素、糖类等杂质较多，不易提纯，而本纯化方法不仅高效而且大大降低了样品对色谱柱的影响，延长了色谱柱的使用寿命，改善了样品色谱图峰型，增加了样品游离氨基酸测定的精度和可靠性，为今后研究与氨基酸有关的生态环境问题提供了良好的技术手段。