纸片法同时检测四类β-内酰胺酶的研究

摘要

目的:细菌耐药的重要机制之一是产生β-内酰胺酶,它能够破坏抗生素中β-内酰胺环结构使抗生素失活.更多的出现了同时产两种或两种以上B-内酰胺酶的多重耐药菌,给临床治疗感染和用药带来了极大的困难.本文设计并经实验建立一种同时筛查四种B-内酰胺酶细菌的简便方法,用于临床分离的革兰阴性杆菌的检测,以期能快速给临床治疗提供信息和依据.方法:将标准大肠埃希菌(ATCC25922)调制成0.5麦氏比浊度的菌悬液,均匀涂布于M-H平板上,如图所示涂上待测菌,并贴上纸片,37℃温箱培养24h后观察抑菌环的直径变化以判断产四类β-内酰胺酶的临床菌株.实验菌株为从2008年10月至2010年3月自天津市公安医院分离的对三、四代头孢中介或耐药的大肠埃希菌30株和对亚胺培南(IMP)中介或耐药的铜绿假单胞菌32株,均经VITEK细菌分析仪鉴定.结果:实验统计结果发现30株耐药的大肠埃希菌,产ESBLsl9株,产AmpC酶4株,同时产ESBLs和AmpC酶的有5株,ESBLs的阳性率为63.3％,高于国内报道平均水平(20～40％),分析原因应该是本实验选择的菌株是本科室保留的对三、四代头孢中介或耐药的E.coli,产酶结果符合之前的检测结果；在32株铜绿假单胞菌中,产ESBLs 11株,产AmpC酶2株,产金属酶(MBL)21株,1株同时产MBL和碳青霉烯酶酶,2株同时产MBL和ESBLs,结果表明PA产β-内酰胺酶的情况复杂,不仅产MBL,也发现了ESBLs、AmpC阳性的菌株和耐美罗培南的菌株,也发现同时产两种或多种β-内酰胺酶并存,这是其多重耐药的重要机制.结论:细菌耐药性的明显增强,要求在临床感染的治疗前和过程中及时快速地筛查出多重耐药菌.本文设计了可简单、快速筛查4类β-内酰胺酶的纸片法,可及时为临床用药提供依据.本法的最大优点是其全面性,及时性和实用性.其局限性不能筛查染色体介导的AmpC酶,不能确定酶的型别,有的尚需确证试验的支持.我们会在此基础上,用分子生物学技术来进一步证实各类酶的型别,检查此筛查方法的准确率和与分子技术的符合率,使此方法有更坚实的依据.