HPLC法定量测定人纤维蛋白原中蔗糖含量的初步研究

摘要

目的:建立定量测定人纤维蛋白原中蔗糖含量的HPLC分析方法。方法:采用Waters Alliance系统、Waters2414示差折光检测器、安捷伦Zorbax Carbohydrate Analysis色谱柱,以ACN:H2O=70:30作为流动相,流速1.4ml/min,柱温30℃测定人纤维蛋白原中的蔗糖。同时测定13批含有蔗糖的重组人凝血因子Ⅷ并与药典方法IEC-HPLC进行方法学比较。结果HPLC法测定蔗糖对照品的保留时间RSD(n=6)为0.17％,峰面积RSD(n=6 )为0.09％。蔗糖在低(5 mg·mL-1)、中(10 mg·mL-1)、高(15 mg·mL-1)三个浓度的回收率分别为96.2％,98.8％,100.3％,平均回收率为98.4％。蔗糖在2 mg·mL-1～20 mg·mL-1 (r=1.0000)范围内与峰面积呈良好的线性关系。HPLC法测定13批重组人凝血因子Ⅷ的蔗糖含量结果与药典IEC-HPLC法测定结果对比显示2种方法相关系数r为1.000,无显著差异(P＞0.05).结论:HPLC法的准确性和精密度良好,能够规避药典IEC-HPLC法的缺点,可以解决干热病毒灭活条件下人纤维蛋白原中蔗糖无法检测的问题。HPLC法与药典方法具有一致性。