抗紫杉醇单克隆抗体的制备及用于紫杉醇检测的ELISA法的建立

摘要

作者以7-木糖基紫杉醇与牛血清白蛋白偶联构建免疫复合物,用基质辅助激光飞行时间解析质谱,测定了该免疫复合物中半抗原结合数量。用该免疫复合物免疫小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0进行融合,获得杂交瘤细胞,筛选出分泌抗紫杉醇抗体的单克隆细胞株3A3。该细胞株产生的单克隆抗体,可较好地特异性识别紫杉醇(与其他天然紫杉烷化合物的交叉反应率分别为:7-木糖基紫杉醇,31.8％；三尖杉宁碱,6.17％；巴卡亭Ⅲ、10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ、1-羟基巴卡亭Ⅰ、13-乙酰-9-二氢巴卡亭Ⅲ和1-乙酰氧基-5-去乙酰基-巴卡亭Ⅰ,<0.11％)。我们利用该单克隆抗体,建立了用于紫杉醇检测的竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)法,其线性范围为0.098-312.5 μg／mL,加样回收率为92.9％-94.8％。此ELISA法灵敏度高,样品处理简单,可为不同类型样品中紫杉醇的快速检测提供新途径。