用人胎儿表皮干细胞膜片、纤维蛋白凝胶和聚乙醇酸构建组织工程皮肤

摘要

目的：观察联合应用表皮干细胞膜片、纤维蛋白原和聚乙醇酸构建组织工程皮肤对修复裸鼠全层皮肤缺损创面的作用。方法：利用Ⅳ型胶原黏附法原代培养人胎儿表皮干细胞,并制备表皮干细胞膜片构建组织工程皮肤表皮；并采用纤维蛋白凝胶+聚乙醇酸作为真皮支架,加入毛乳头细胞和成纤维细胞共同构建组织工程皮肤,将其移植于裸鼠的全层皮肤缺损创面,并以角质形成细胞膜片+PGA+纤维蛋白凝胶作为组织工程皮肤对照,观察创面愈合情况,并于移植30～35d后行创面取材,H.E染色观察组织学情况。结果：表皮干细胞经含高浓度血清的培养液培很快呈复层生长,Dispase酶消化后可完整揭下表皮干细胞膜片作为组织工程皮肤表皮；毛乳头细胞和成纤维细胞可生长于于作为植皮支架的凝胶+PGA材料的各个层面,并伸展为梭形或多极状；表皮干细胞膜片置于人工真皮的表面培养24～48h,结合较为紧密,可成功构建组织工程皮肤；组织工程皮肤移植实验中,移植30～35d后观察创面愈合情况,见实验组创面2例已愈合,1例大部分愈合；对照组创面均未愈合；各组创面于取材前均未发现有毛发长出皮肤.常规H.E染色病理切片显示：移植区皮肤表皮层明显较对照组表皮层厚,真皮乳头已有明显形成并可见真皮层有结构典型的毛囊形成,真皮间大部分PGA材料纤维已经降解吸收,仅可见极少量PGA材料纤维存在,对照无钉突及真皮乳头,无毛囊形成。结论：利用人胎儿表皮干细胞膜片、纤维蛋白凝胶和聚乙醇酸构建组织工程皮肤可有效地修复裸鼠全层皮肤缺损创面。