热损伤后角质形成细胞培养上清对真皮成纤维细胞生物学行为的影响

摘要

目的：探讨热损(创)伤后角质形成细胞(KC)上清对真皮成纤维细胞(Fibroblast,Fb)生物学行为的影响。方法：建立KC热损伤模型,收集正常培养及热损伤后12h细胞培养上清,配制细胞条件培养液；分离培养人正常Fb,以50％浓度细胞条件培养液为效应浓度组,单纯DMEM组为对照.采用噻唑蓝法测定热损伤后KC培养上清对Fb增殖情况的影响；通过流式细胞仪,免疫荧光法、Real-Time PCR分别检测热损伤后KC培养上清对Fb凋亡及向肌成纤维细胞(MyoFibroblast,MFb)转分化的影响。结果：细胞增殖测定:热损伤上清条件培养液组12、24、36、48 h OD值(0.309±0.004,0.333±0.004,0.339±0.003,0.397±0.006)均高于同时间点DMEM组(0.232±0.002,0.258±0.006,0.268±0.005,0.289±0.005)差异均有统计学意义(P＜0.01),其中热损伤上清条件培养液组12、24 h OD值均高于同时间正常上清条件培养液组OD值(0.293±0.004,0.316±0.006)差异具有统计学意义(P＜0.05),36、48 h OD值低于同时间点正常上清条件培养液组OD值(0.343±0.005,0.415±0.006)48 h时间点差异具有统计学意义(P＜0.05)；凋亡测定中,热损伤上清组与DMEM组比较可明显抑制细胞凋亡(P＜0.01)、与正常上清组比较差异亦有统计学意义(P＜0.05),免疫荧光、Real-Time PCR检测结果显示:热损伤上清组α-SMA的表达上调,提示热损伤上清组可刺激加快Fb向MFb转分化。结论：热损(创)伤后12hKC上清可明显促进Fb的增殖、抑制细胞凋亡发生、加快Fb向MFb转分化。