IL-27促进DC分化成熟及其作用机制的实验研究

摘要

目的:探讨IL-27对人外周血单个核细胞来源的树突状细胞(Dendritic cell,DC)分化成熟及其作用机制的影响.方法:从正常健康人外周血中分离出单个核细胞,将其用GM-CSF,IL-4体外培养7d,并于培养第5天加入不同刺激因子分为四组:Negative组、TNF-α组(TNF-α:20ng/ml)、IL-27组(IL-27:20ng/ml)、TNF-α+IL-27组(即双细胞因子组,TNF-α:10ng/ml +IL-27:10ng/ml).用倒置显微镜观察培养过程中DC的形态学变化,用流式细胞术检测DC表面共刺激分子CD1a、CD83和CD80、CD86的双阳性率,以及表面粘附分子ICAM-1的表达水平,用MTS方法检测DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力,用ELISA的方法检测DC培养上清中细胞因子IL-12、IFN-γ的分泌水平,用Western-blot法检测DC信号通路蛋白MAPKp38、P-STAT1和P-STAT3的含量.结果:光镜下,IL-27组和TNF-α+IL-27组诱导至第7天DC呈现典型的成熟形态学特征;其DC表面CD1a和CD83、CD80和CD86的双阳性率显著增高,与TNF-α组相比具有统计学意义(P＜0.05),粘附分子ICAM-1的表达水平与Negative组相比也明显升高;随DC与T细胞比例增加,其刺激T细胞增殖的能力增强.当DC与T细胞比例在1∶10时,TNF-α+IL-27组的刺激作用显著高于TNF-α组和IL-27组,结果具有统计学意义(P＜0.05).TNF-α组、IL-27组和TNF-α+IL-27组DC培养上清中细胞因子IL-12、IFN-γ的分泌水平较Negative组明显上调,其中TNF-α+IL-27组的分泌水平较TNF-α组仍具有统计学意义.细胞内信号通路蛋白MAPKp38、P-STAT1和P-STAT3的水平较Negative组明显上调,以TNF-α+IL-27组更为明显.结论:体外实验中,细胞因子IL-27可以直接或者协同TNF-α诱导DC成熟,刺激T淋巴细胞增殖功能增强,诱导产生更多的IL-12和IFN-γ,其机制可能通过活化MAPKp38、P-STAT1、P-STAT3等信号通路.