基于γ-CD/Pyrene介导的分子信标自组装技术对单碱基多态性的高灵敏检测研究

摘要

单碱基多态性(SNP)具有数量多、分布广和稳定遗传等特点.许多疾病都与基因序列上单碱基多态性有直接的关系.单碱基多态性的识别检测在分子生物学、遗传学、疾病的发病机理研究及早期诊断与治疗等方面都具有非常重要的意义.目前SNP的检测方法很多,各具优点,但存在灵敏度低,难用于实际体系,操作复杂等局限性.本工作利用γ-环糊精介导两端标记芘分子的DNA白组装形成带有芘二聚体荧光基团的信号探针,结合滚环放大技术(RCA),发展了一种新型的SNP检测方法.该方法以B地中海贫血症的-28位点突变型DNA为模式目标.设计挂锁DNA,其3',5'端与突变型DNA完全互补.以突变型DNA为模版使挂锁DNA在E.coli DNA连接酶的作用下特异性连接成环,加入引物进行RCA放大,信号探针在产物链的介导下白组装,使芘二聚体的荧光发射强度降低.该方法操作简便,快速,特异性好,灵敏度高,并且利用芘二聚体分子荧光寿命相对较长的优点,可用于血清等复杂体系的检测.此方法可能为临床单碱基突变的检测提供新的思路.