新型链霉菌调控蛋白的原核表达和体内表达检测

摘要

参与抗生素生物合成的调控蛋白有很多，这其中同源性更近的两个蛋白(放线紫红素合成途径中的actⅥ-ORFA和美达霉素基因簇中的med-ORF10)在前期的功能分析中认为是参与抗生素合成调节，但机制未知。本研究以这两个基因作为研究对象，分别克隆到表达载体pET28a上，导入大肠杆菌中进行原核表达；经过诱导条件的优化后目的蛋白得到高效的可溶性表达；用纯化的目的蛋白注射兔子获得高效价的抗体；利用原核表达体系总蛋白来检测制备的抗体，发现抗体特异性很高。然而利用这些抗体检测这两种抗生素野生菌的总蛋白，却发现阳性条带比预期值大很多，推测把含有相同抗原表位的其他蛋白检测出来了，而目的蛋白表达量太低未能检测出来；也可能是在野生菌中目的蛋白发生修饰(形成二聚体)，也有可能目的蛋白分泌出来；进一步对天然状态下的纯化蛋白进行动态光散射分析初步表明这两个小蛋白呈单体存在。