假单胞菌B2对高分子量多环芳烃芘的降解条件优化及降解基因

摘要

目的：获得一株芘高效降解菌株,优化菌株对芘的最佳降解条件,并对其降解基因进行克隆与分析。方法：芘平板升华法分离芘降解菌株,分离的菌株经16S rDNA基因序列的比对及系统发育进化分析进行鉴定；利用正交设计方法优化菌株对芘的降解,构建多元非线性模型预测最佳降解条件；运用PCR技术克隆了B2的邻苯二酚-2,3-双加氧酶基因(B2C23O)(I.2.A亚家族),对核酸序列进行全面分析,预测该酶蛋白的二级结构,分析结构与功能的关系。结果：高效花降解菌株B2与假单胞菌属(Pseudomonas) 16S rDNA序列同源性在99%以上；在最佳降解条件下，可完全降解花浓度达38.214 mg/L；克隆的B2C230全长880 bp，具有一个完整的阅读框，编码246个氨基酸。结论：菌株B2为假单胞菌属(Pseudomonas)；在6天内完全降解花浓度为目前文献报道最高；通过对B2C230基因编码氨基酸进行分析，发现其具有邻位断裂双加氧酶模式结构，确定了菌株B2通过邻位裂解途径降解芘代谢中间产物邻苯二酚。