长爪沙鼠肝脏FASN、SREBP启动子区的钓取及CpG岛甲基化的初步研究

摘要

目的：用焦磷酸测序法获得长爪沙鼠SREBP、FASN基因启动子区CpG岛甲基化的水平,以用于今后评价沙鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型及筛选甲基化水平的遗传标记. 方法：选取新生仔鼠10只(ZS/幼组),青年鼠20只(正常对照组10只,标记为3Y组),高脂饮食诱发的模型组10只,标记为4M组),8月龄中老年鼠10只(标记为6Y组),均为雄性,按组采集血清(新生鼠除外)用于总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)检测,同时采集肝脏大叶标本二份,一份作常规HE染色的病理学观察,一份钓取两个基因的启动子区后焦磷酸测序法检测两个基因的甲基化水平,用QPCR及WB方法检测两个基因转录水平及表达量的变化. 结果：模型组鼠及8月龄组沙鼠均出现高脂血症,血清TC及TG均不同程度地出现了显著上升,对照组鼠血脂正常.病理学检查显示,模型组与8月龄组肝脏出现较为明显的脂肪变性,而青年组肝脏无异常发现,新生仔鼠肝血窦中可见大量成堆分布有单核细胞和红细胞.SREBP获得两个1.8Kb左右的启动子区,FASN获得了两个0.9Kb的启动子区.FASN基因的甲基化率呈现出3月龄对照组＞3月龄模型组＞8月龄组,SREBP基因甲基化率呈现出3月龄对照组＞8月龄组＞3月龄模型组,除新生鼠组外,SREBP、FASN两个基因的转录水平与表达量均为正常对照组＞8月龄组＞模型组. 结论：长爪沙鼠NAFLD模型中SREBP、FASN呈现出低甲基化率的趋势,SREBP基因表达趋向递减,而FASN基因表达量趋向增加.