抗犬细小病毒重组VP2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

摘要

以纯化的CPV2a细胞培养物免疫BALB/c小鼠,采用CPV2重组VP2蛋白抗体间接ELISA方法检测,应用常规杂交瘤技术获了3株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为E4F11F7,E3B9C4,F10G10A10,间接ELISA检测腹水效价分别为1:320000、1:8000、1:500,亚类鉴定结果表明,E4F11F7为IgG2a,E3B9C4和F10G10A10均为IgM,三者轻链均为k型;ELISA叠加试验的增值结果表明,3株单克隆抗体识别的抗原位点不同.间接免疫荧光试验,结果显示,3株单克隆抗体均能与CPV2a病原发生特异性反应;Western-blot和ELISA分析结果显示3株单克隆抗体均能与重组vp2蛋白和CPV发生反应,而与犬瘟热病毒及犬腺病毒等无交叉反应;证明这些单抗具有良好的特异性;特异性抗CPV2/2a重组VP2蛋白单克隆抗体的获得,为CPV准确快速的病原诊断提供了物质基础.