猪Abcbl基因核心启动子的筛选及Spl转录因子对其表达的影响

摘要

目的：本研究旨在筛选猪Abcb1基因的核心启动子区,利用定点突变及siRNA检测Spl转录因子结合位点在猪Abcbl基因转录调控中的作用. 方法：本文首次通过5'-RACE确定了猪Abcb1基因的转录起始位点(TSS),利用猪基因组DNA获得了1905bp的5'非翻译区,并预测了转录因子结合位点和CpG岛,发现猪Abcb1基因的5'非翻译区存在AP1、CEBPα、CEBPβ和Spl等转录因子结合位点,并存在2个CpG岛. 结果：通过构建一系列启动子截短片段质粒,证实猪Abcb1基因启动子的-195～+25bp为核心启动子区,可决定该基因的基础转录水平.在核心启动子区存在多个Spl转录因子结合位点,定点突变-61/-51bp和-43/-31bp位点后均能显著降低启动子的活性,证实Sp1转录因子的主要结合位点存在于该区域.siRNA干扰细胞内的Spl转录因子可降低猪Abcb1基因的启动子活性,并能影响P-gpmRNA及蛋白表达水平.最后通过CHIP证实,细胞内的Spl转录因子可与猪Abcb1基因的启动子结合. 结论：本研究结果表明猪Abcb1基因启动子的-195～+25bp为核心启动子区,Sp1转录因子可以与猪Abcbl基因的核心启动子区的Sp1转录因子结合位点直接结合,从而正向调控猪Abcbl基因的转录,该研究结果为深入研究猪P-gp的转录调控提供了理论基础.