直链和支链PEG定点修饰对人血清白蛋白结构和药效学的影响以及PEG-人血清白蛋白的药代动力学研究

摘要

人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)是调剂体内液体分布的最重要的调节剂,维持着血浆内80％的胶体渗透压(colloid osmotic pressure,COP),也是在血液中运输许多内源性化合物(例如脂肪酸、血红素、胆红素等)的重要载体.针对HSA在临床应用中由于血管通透性增加所导致的渗出增加以及HSA来源较为紧张的问题，本实验室采用高相对分子质量(relative molecular mass, Mr)的PEG对HSA进行定点修饰，设想通过PEG赋予HSA较大的分子半径来减少HSA的血管渗漏、延长其半衰期、提高其用药安全性、降低其用药频率。本论文在本实验室以往的研究基础上，通过研究20 kDa直链和支链PEG定点修饰的HSA在大鼠失血性休克模型中作为血容量扩充剂的疗效，考察PEG修饰对HSA作为血容量扩充剂的影响和其相关机制，并考察支链PEG修饰的HSA是否具有药效学的优势;利用小角散射技术研究不同Mr和不同构型的PEG在HSA表面的空间取向和对蛋白结构的影响，并采用表面等离子共振技术(surfaceplasmon resonance, SPR)研究其对于临近Cys34的血红素结合位点结合能力的影响;通过采用Nano液相-串联质谱(nanoliquid chromatography tandem masschromatography, NanoLC-MS/MS检测PEG-HSA经酶解后的肤段来对完整的PEG-HSA进行定量，建立一种新的高灵敏度、高选择性地对大鼠血浆中的PEG-HSA进行定量的方法，以解决放射性同位素不稳定、易脱落的问题，为更准确地反映药物真实的药代动力学情况提供新的方法。