益骨汤含药血清通过经典wnt信号通路促进成骨细胞增殖分化的研究

摘要

目的：在经典wnt信号通路抑制剂DKK1的干预下,观察益骨汤含药血清对成骨细胞的经典Wnt信号通路的影响,探究益骨汤治疗骨质疏松的作用机制,为临床使用补肾活血中药防治骨质疏松症提供实验依据. 方法：将40只雌性SD大鼠,随机分成2组,益骨汤水提液组和空白对照组,连续灌胃10d,获取含药血清.从乳鼠颅盖骨中分离培养成骨细胞,实验分为4组,A组(益骨汤含药血清组)、B组(DKK1含药血清组)、C组(DKK1+益骨汤含药血清组)、D组(空白血清对照组).进行细胞增殖MTT检测、碱性磷酸酶活性检测、RT-PCR检测经典Wnt/β-catenin通路中β-catenin、LRP5、DKK1基因的表达情况. 结果：MTT法动态观察各组成骨细胞增殖,发现A组(益骨汤含药血清组)高于D组(空白血清组)差异有统计学意义(P＜0.05);B组(DKK1组)明显低于A组(益骨汤含药血清组)、C组(DKK1+益骨汤含药血清)、D组(空白血清组),差异有统计学意义(P＜0.05);各组成骨细胞ALP活性测定情况,发现同一时间点A组(益骨汤含药血清组)高于D组(空白血清组)差异有统计学意义(P＜0.05);B组(DKK1组)明显低于A组(益骨汤含药血清组)、C组(DKK1+益骨汤含药血清)、D组(空白血清组),差异有统计学意义(P＜0.05);RT-PCR检测经典Wnt/β-catenin信号通路β-catenin、LRP5、TCF,DKK1基因,发现A组(益骨汤含药血清组)与与C组(DKK1+益骨汤含药血清组)、D组(空白血清对照组)相比β-catenin、LRP-5、TCFmRNA表达明显上调,DKK1mRNA的表达下调(P＜0.05); 结论：益骨汤含药血清可能是通过抑制DKK1的高表达,从而上调经典Wnt/β-catenin信号中β-catenin、LRP-5、TCF基因的表达,达到促进成骨细胞增殖,起到抗骨质疏松作用.