猪腹泻病毒可视化基因芯片的两种靶基因标记技术的比较

摘要

本研究同时采用常规PCR和不对称PCR分别进行靶基因的生物素标记,应用于金标银染可视化芯片,分析其对猪腹泻病毒可视化芯片杂交效率的影响.选取PEDV的S和M基因,TGEV的N和S基因,GAR的VP7和NSP4基因设计引物.根据目的基因片段设计探针,在其5'端修饰15个T碱基后利用芯片点样仪喷制芯片.应用常规PCR和不对称PCR两种标记方法,进行生物素掺入标记,在相同条件下与芯片进行杂交.利用生物素-链霉亲和素的系统,将链霉亲和素修饰的纳米金引入反应体系,通过银染显色后直接眼观结果.结果表明应用此可视化芯片特异性好,CSFV,PRRSV,PCV-2,JEV杂交结果呈阴性.不对称PCR标记法可有效的提高杂交效率,不对称PCR和常规PCR标记技术的最低检测浓度分别为105copies·μL-1和107copies·μL-1,前者灵敏性是后者10-100倍.应用不对称PCR对样品进行生物素标记,可明显提高腹泻病毒可视化芯片的杂交效率,有利于检测型可视化芯片的应用.