牛布鲁氏菌病、结核、炭疽、口蹄疫、病毒性腹泻黏膜病、副流感、传染性鼻气管炎可视化基因芯片检测方法的建立

摘要

针对现有牛病病原检测方法指标单一,操作复杂的现状,拟建立一种可高效检测牛布鲁氏菌病、结核、炭疽、口蹄疫、病毒性腹泻黏膜病、副流感、传染性鼻气管炎的基因芯片技术.根据已公布的各病原核酸序列,设计引物和探针.利用多重PCR方法扩增目的片段,扩增产物与探针特异性杂交,芯片反应显色后肉眼观察进行检测结果判定.优化反应条件、建立检测方法,同时对检测方法的灵敏度、可重复性、特异性、保存期等进行评价.结果显示,该基因芯片检测方法单一病原灵敏度检测可达1.0×10-6 ng/μL,混合病原灵敏度检测可达1.4×10-5 ng/μL;各病原间无交叉反应,检测健康牛血清、组织,牛流行性热病毒也均无响应;针对同一阳性质控品,芯片重复率达100％.保存期试验表明,芯片在2～8℃至少可保存6个月.检测30份临床样本,结果与标准方法结果一致.实验建立的方法具有高通量、高灵敏度、高特异性等特点,可在3h内完成同时对七种牛重要疫病的检测,在牛群疫病诊断、净化及流行病学调查等方面有良好的应用前景.