北极狐γ-干扰素cDNA的克隆、表达及活性测定

摘要

为研究狐γ-干扰素的生物学活性，应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从北极狐外周血淋巴细胞中扩增出γ-干扰素(VuIFN-γ)cDNA。序列分析表明VuIFN-γcDNA全长501bp，编码23个氨基酸的信号肽和144个氨基酸的成熟肽蛋白，与已发表的银黑狐和犬IFN-γ核苷酸序列同源性为99．8％和99．4％；氨基酸同源性均为100%。应用原核表达系统高效表达北极狐γ-干扰素成熟肽蛋白，SDS-PAGE和Western-blot分析表达的融合蛋白分子量约为19kD，以不溶性的包涵体形式存在。重组蛋白经纯化和复性，在Vero和MDCK细胞上可明显抑制VSV病毒的复制，并测出北极狐重组γ-干扰素的活性单位分别为1．0×108U／mg和1.56×105U／mg，为进一步开发基因工程狐干扰素奠定基础。