HDA检测中蜂囊状幼虫病毒

摘要

参照已发表的中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)基因序列,针对其结构蛋白基因设计了2条特异性引物,建立了一种灵敏、特异、快速的CSBV依赖解旋酶的扩增Helicase-Dependent Amplification(HDA)检测方法.提取感染CSBV的囊状幼虫RNA,反转录为cDNA,以其为模板,通过反复实验,对CSBV的HDA方法进行优化,验证其特异性、敏感性和稳定性,并对37份临床样品同时进行症状诊断、电镜观察,RT-PCR检测和HDA检测.结果证明所建立的HDA方法具有较高的特异性、敏感性和稳定性,以含CSBV结构蛋白基因的重组质粒为模板,最低可检出10 pg DNA.与健康幼虫、ABPV、CBPV、BQCV和DWV的cDNA均无交叉反应,对37份样品检测,结果RT-PCR和HDA均能检出6份CSBV阳性样本,但通过电镜观察只检测到4份CSBV阳性样本.整个扩增反应可在90分钟内完成,操作简单,为CSBV的现场快速检测提供更加简便的方法,满足基层检疫的需要.