紫外线照射经活性氧信号通路抑制人晶状体上皮细胞膜钙ATP酶的表达

摘要

目的：研究紫外线(UVB)照射对人晶状体上皮细胞系B-3(HLE B-3)细胞质膜钙ATP酶3(plasma membrane calcium ATPase3,PMCA3)表达的影响,探讨其活性氧信号通路之间的关系. 方法：HLE B-3细胞进行培养和传代,当细胞达80％以上融合时用不同剂量的UVB(0mJ/cm2,5mJ/cm2,10mJ/cm2和20mJ/cm2)照射,然后继续培养不同的时间进行以下指标的检测：MTT法检测UVB对细胞增殖的影响;JC-1染色检测UVB对细胞线粒体膜电位(△Ψm)的影响;DCFH-DA染色检测细胞内活性氧(ROS)的变化;Annexin V-FITC/PI染色检测UVB对细胞凋亡的影响;Fluo-3/AM染色检测细胞内钙离子浓度的变化;实时荧光定量PCR检测UVB对PMCA3在mRNA水平表达的影响;Western blot方法检测UVB对PMCA在蛋白质水平表达的影响. 结果：MTT结果显示UVB可抑制HLE B-3细胞的生长,呈时间和剂量依赖性;随UVB照射剂量的增加,HLE B-3细胞线粒体膜电位下降,细胞内活性氧水平、细胞凋亡及细胞内钙离子浓度增加,PMCA3mRNA表达下降,PMCA蛋白表达下降. 结论：UVB能使HLE B-3细胞PMCA3在mRNA水平以及PMCA在蛋白质水平表达下降,并可通过活性氧信号通路发挥作用.PMCA3在UVB诱导的HLE B-3细胞凋亡中可发挥重要作用.