三种鱼类弹状病毒实时荧光RT-LAMP检测试剂盒的建立与初步应用

摘要

构建检测三种鱼类弹状病毒实时荧光环介导等温RNA扩增(LAMP)试剂盒,用于现代口岸快速检测.对LAMP试剂进行组合优化,采用荧光染料显色方法判定LAMP结果,避免污染,减少假阳性结果产生;将以上优化技术及试剂整合成时荧光LAMP试剂盒;将建立的LAMP检测试剂盒和FQ-PCR检测试剂盒对样品进行对比试验.结果表明,研制的FQ-LAMP试剂盒与市售FQ-PCR试剂盒敏感性无差异,两者符合率100％,检出低限分别为2.4pg、3.6pg和4.5pg;检测病毒IPNV、HRV和PFRV,无假阳性或假阴性,特异性强;构建的阳性质粒20次冻融和-20°C半年保存试验,稳定性好.三种弹状病毒FQ-LAMP试剂盒检测斑马鱼样品,证实三者引物无交叉反应,与FQ-PCR试剂盒检测结果一致.该试剂盒具有操作简单,便携,成本低,灵敏度高、特异性强,实验过程的数据化和自动化,适合现场检测和大规模监控.