TLR4/NF-κB在低氧暴露下大鼠肠道粘膜屏障功能损伤及细菌移位中的作用研究

摘要

目的：观察低氧暴露下大鼠空肠组织Toll样受体4(TLR4)/核因子(NF-κB)的表达,并应用TLR4激动剂脂多糖(LPS)和NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)干预,探讨TLR4/NF-κB在低氧暴露下大鼠肠道粘膜屏障功能损伤及细菌移位中的作用.方法：成年SD大鼠70只,随机分为5组(n=14):平原对照组(C组)、单纯缺氧组(H组)、缺氧+PDTC组(HP组)、缺氧+ LPS组(HL组)、缺氧+PDTC+ LPS组(HPL组).C组置于平原,H、HP、HL、HPL组动物置于模拟海拔7000 m的低压舱内.HP和HPL组于减压开始前1h给予腹腔注射PDTC(100 mg/kg),连续3d.HL和HPL组于减压开始48 h后给予腹腔注射LPS(0.5 mg/kg)1次.各组72 h后取材,电镜观察肠道超微结构,细菌培养观察移位情况,动态浊度法测定血清LPS含量,ELISA法测定血清TNF-α、IL-6浓度,荧光定量RT-PCR检测TLR4 mRNA表达,Western检测NF-κBP65蛋白表达变化.结果：H组、HL组肠粘膜可见不同程度损伤,硝酸镧示踪法可见La3+透过肠上皮和血管内皮分布于上皮紧密连接、基底膜及血管外间质.阻断TLR4/NF-κB信号通路后损伤明显减轻.H组和HL组细菌移位率均高于C组(P＜0.01),应用PDTC干预后HP组、HPL组移位率分别较上述两组降低(P＜0.05).与对照组比较,H组和HL组血清LPS、TNF-α、IL-6含量明显升高(P＜0.01),HP组、HPL组血清因子含量分别较H组、HL组降低(P＜0.01).荧光定量RT-PCR和Western分别对TLR4mRNA、NF-κBP65表达量的检测与血清因子结果一致(P＜0.01).结论：TLR4及NF-κB在急性缺氧大鼠的肠道组织中表达升高,NF-κB抑制剂PDTC可以下调TLR4、NF-κB的表达,并减轻大鼠肠道损伤和细茵移位,提示TLR4/NF-κB信号通路在低氧暴露后大鼠肠道屏障功能损伤和细茵移位的机制中可能起重要作用.