光动力增效剂联合FECH-siRNA提高5-氨基酮戊酸光动力诊断对卵巢癌细胞的特异性与敏感性研究

摘要

目的：在单独使用siRNA或光动力增效剂的基础上,联合应用siRNA和单一增效剂,增强5-氨基酮戊酸光动力诊断敏感性与特异性,减少ALA用量以避免相关的毒副作用.并为多种增效剂,或siRNA同多种增效剂联合应用,进一步提高光动力诊断对卵巢特异性与敏感性提供依据. 方法：胶原酶消化法分离人卵巢成纤维HOF细胞.脂质体介导亚铁螯合酶-siRNA转染,应用RT-qPCR、western blot检测敲减后人卵巢癌SK-OV-3细胞亚铁螯合酶的RNA和蛋白质变化,荧光显微镜检测比较处理后的两种细胞内原卟啉Ⅸ(protoporphyrin,PpⅨ)荧光强度.荧光显微镜检测筛选5-氨基酮戊酸及去铁胺、乙二胺四乙酸二钠钙、二甲基亚砜对SK-OV-3细胞的最佳作用条件,比较此条件下两种细胞的荧光差异.同法比较siRNA联合单一光动力增效剂对SK-OV-3细胞PpⅨ荧光增强作用. 结果：0.3mM5-氨基酮戊酸可诱导SK-OV-3细胞出现PpⅨ荧光,0h至6h为PpⅨ荧光的上升期(P＜0.05).siRNA敲减SK-OV-3细胞后,RNA降至0.05±0.01倍(P＜0.01),蛋白质降至0.20±0.07倍(P＜0.01),与5-氨基酮戊酸联合应用后PpⅨ荧光明显增强(P＜0.05).三种光动力增效剂联合5-氨基酮戊酸可提高荧光强度(P＜0.01),三者间无差异(P＞0.05).去铁胺作用5h时,PpⅨ荧光最强(P＜0.05).乙二胺四乙酸二钠钙在0至125mM间时荧光强度与浓度呈正相关(P＜0.05).二甲基亚砜的最佳作用条件为6％浓度作用3h(P＜0.05).siRNA或三种增效剂均不能增强HOF细胞的PpⅨ荧光(P＞0.05).乙二胺四乙酸二钠钙或二甲基亚砜联合siRNA更加有效增强SK-OV-3细胞的PpⅨ荧光(P＜0.05);去铁胺联合siRNA与单独使用siRNA相比,荧光强度无明显增强(P＞0.05). 结论：siRNA转染SK-OV-3细胞后可显著敲减其RNA和蛋白质的表达;但不增强HOF细胞的PpⅨ荧光强度.去铁胺、乙二胺四乙酸二钠钙、二甲基亚砜分别联合5-氨基酮戊酸均能增强SK-OV-3细胞的PpⅨ荧光,但均不能增加HOF细胞的荧光.siRNA联合乙二胺四乙酸二钠钙或二甲基亚砜时,存在协同效应,而siRNA联合去铁胺无此效应.本研究证实应用光动力增效剂可扩大卵巢癌与正常细胞的荧光差异,提高5-氨基酮戊酸的靶向性且减少所需剂量,不同靶点联合应用能更有效地提高卵巢癌细胞的PpⅨ荧光强度.