AMPKα2缺失降低脂多糖诱导的肿瘤坏死因子-α分泌

摘要

目的：细菌感染在慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)的发病和急性加重中起重要作用.脂多糖诱导的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的经典通路是通过Toll样受体和核因子-κB介导信号,但其具体的信号机制尚未明确.本研究旨在明确AMPK在脂多糖诱导的TNF-α分泌过程中的作用.rn 方法：将C57/BL6野生型和AMPKα2-/-健康雄性小鼠随机分为健康对照组和脂多糖组,每组各6只.脂多糖组采用腹腔注射脂多糖(3 mg/kg),对照组同时给予相等体积生理盐水,1.5h后收集血清.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中TNF-α水平.分离培养野生型和AMPKa,2-/-雄性小鼠血液单核细胞，给予0.1μg/ml脂多糖刺激，蛋白免疫印迹法检测AMPK磷酸化水平，ELISA法检测细胞上清液中TNF-a分泌。培养人单核细胞性白血病细胞(THP1)，在有无Compound C(10-5M)存在下给予AICAR(10-4 M)刺激，蛋白免疫印迹法检测AMPK磷酸化水平，ELISA法检测细胞上清液中TNF-α水平。rn 结果：脂多糖组与对照组相比，血清中TNF-α水平显著增加(P<0.01)。给予脂多糖处理的AMPKa,2-/-小鼠血清中TNF-α水平[(155±30) pg/mI]显著低于脂多糖处理的野生型小鼠[(340±79)pg/ml，差异有统计学意义(P<0.01)。小鼠单核细胞AMPKa,2缺失抑制脂多糖诱导的AMPK磷酸化，AMPKa,2-/-小鼠单核细胞上清液中TNF-α水平[(35±4)pg/ml]显著低于野生型小鼠[(50±2)pg/ml]，差异有统计学意义(P<0.05)。在THP 1细胞上，Compound C能够显著抑制AICAR诱导的AMPK磷酸化，抑制AICAR诱导的TNF-α分泌，差异有统计学意义(P<0.05)。rn 结论：AMPK是参与脂多糖诱导TNF-α分泌过程的重要信号分子，AMPK通过其磷酸化状态调节脂多糖诱导的TNF-α分泌，AMPKα2缺陷降低小鼠及单核细胞脂多糖诱导的TNF-α分泌。