HGF基因活性胶原/壳聚糖支架体外诱导BMSC向毛囊细胞分化研究

摘要

目的:毛囊、汗腺等附属器官的构建是实现皮肤完全再生的一大挑战.本研究将肝细胞生长因子质粒DNA(pDNA-HGF)引入胶原/壳聚糖支架,制备了一种基因活性皮肤再生材料(GAS),以实现HGF质粒的原位转染和表达,系统研究了该GAS体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)向毛囊细胞分化的性能,以期用于皮肤再生中毛囊的重建.rn 方法:将DNA浓度20 μg/mL的pDNA-HGF/脂质体复合纳米粒子悬液100 μL导入胶原/壳聚糖多孔支架,得到GAS.然后,将250万/mL BMSC悬液100 μL种于GAS,体外培养3周.利用免疫荧光染色,观察BMSC在GAS中的形态.采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测GAS中BMSC表达毛囊细胞相关基因的水平.采用Western blotting(WB)检测GAS中HGF和毛囊细胞相关蛋白的表达量.rn 结果:BMSC能在GAS中保持良好的细胞形态。在培养1w和3w时，GAS中HGF的表达量均明显高于相应对照组。BMSC向毛囊细胞分化信号因子碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase)、多能蛋白聚糖(Versican)和Ⅳ型胶原(Collagen Ⅳ)的基因和蛋白表达水平，在GAS中都明显提高。其中1w时，实验组中，Versican关键基因的表达量是对照组的18倍。rn 结论:pDNA-HGF活化的胶原/壳聚糖支架能够有效促进BMSC原位表达HGF，进而诱导BMSC向毛囊细胞分化，对于实现皮肤修复中毛囊再生具有潜在应用价值。