抗骨硬化素单链抗体基因的构建、表达,产物纯化及活性分析

摘要

构建抗骨硬化素单链抗体表达载体并进行活性分析.提取抗SOST单克隆抗体5H3D1杂交瘤细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增抗体轻链可变区基因(VL)和重链可变区基因(VH)通过重叠延伸拼接(SOE) PCR方法,在VL和VH基因之间引入Linker (Gly4Ser)3,连接成单链抗体SOST-scFv(VL-Linker-VH).将测序正确的scFv基因克隆至表达载体PET-22b(+)后转入HEK293细胞进行分泌表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE鉴定表达产物,ELISA和West-blot检测表达蛋白的反应活性,茜素红染色观察单链抗体对体外培养骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.成功构建了抗S0ST单链抗体表达载体，表达产物具有确定的免疫结合活性和有效的体外诱导分化成骨作用，为抗体治疗骨质疏松疾病奠定了实验基础。