不同脱细胞方法对猪纤维环生物力学特性及组织结构的影响

摘要

探讨不同脱细胞处理方法对猪尾椎间盘纤维环生物力学特性及组织结构的影响,用不同脱细胞方法对椎间盘纤维环进行脱细胞处理,探讨各种方法对纤维环生物力学特性及组织结构的影响,为构建组织工程纤维环提供实验依据.取新鲜猪尾纤维环60个,随机分为4组,每组15个.Triton X-100组(A组):先将纤维环放入Tris-HCl低渗缓冲液中振荡48h低渗处理,再用TritonX-100、DNaseⅠ和RNaseA对纤维环进行脱细胞处理;SDS组(B组):将纤维环冻融3次,接着用SDS、DNase Ⅰ和RNaseA对纤维环进行脱细胞处理;胰蛋白酶组(C组):用含胰蛋白酶、DNase Ⅰ和RNaseA的Tris缓冲液对纤维环脱细胞处理;对照组(D组):新鲜纤维环不做任何处理.采用HE染色与扫描电镜方法，观察各组脱细胞情况以及纤维环超微结构的变化;电镜观察各种脱细胞方法对纤维环超微结构的影响，采用生物化学和生物力学方法检测测定各组纤维环的胶原含量、氨基葡聚糖(GAG)含量及力学参数性能。结果表明，Triton X-100处理后的猪尾椎间盘纤维环无细胞残留，结构无破坏，基质成分及力学性能保存留良好，较其他两组更适合于构建组织工程纤维环。